Sistema PCR in tempo reale (qPCR) – Termociclatore quantitativo TT-Q4505T

Teoria di base della quantificazione qPCR

Anziché accontentarsi di valori di riferimento instabili e risultati imprecisi, il sistema PCR in tempo reale TT-Q4505T combina il processo di copia dei filamenti di DNA con l'acquisizione ad alta velocità di immagini dei traccianti fluorescenti mentre la reazione è ancora in corso. 

Grazie a un sistema avanzato di rilevamento a fibra ottica per velocizzare l'acquisizione delle immagini, questo strumento qPCR non si limita ad attendere la conclusione del processo per mostrare i risultati. Monitora i dati esatti ciclo per ciclo direttamente su un elegante touchscreen da 7 pollici, eliminando i calcoli complessi e fornendo una serie di dati chiari e precisi.

Monitoraggio della fase esponenziale

La strategia principale si basa sul tracciamento di quelle sostanze chimiche fluorescenti che brillano con maggiore intensità ogni volta che compare una nuova sequenza di DNA. Grazie a una potente sorgente di eccitazione a LED e a fotodiodi sensibili, il nostro sistema PCR in tempo reale registra la luce proprio nel momento in cui il segnale aumenta più rapidamente. Ciò si traduce in picchi notevolmente più nitidi e distinti per la vostra analisi.

Metodologia del ciclo di quantificazione (Cq/Ct)

Stiamo cercando l'istante preciso in cui la fluorescenza finalmente emerge dal rumore di fondo. È un po' come individuare una torcia luminosa in una stanza completamente buia. Quel numero di ciclo specifico indica esattamente quanto materiale di partenza è stato introdotto nella provetta all'inizio, fornendo una precisione sufficiente per individuare differenze di concentrazione anche minime, pari a 1.5 volte.

Sensibilità e intervallo di misurazione

Quando tutti i parametri sono impostati alla perfezione, è possibile individuare anche una singola copia di un gene bersaglio. Il sistema mantiene un'accuratezza incredibile anche con un'ampia gamma di campioni. Nello specifico, parliamo di un intervallo dinamico lineare di 10 ordini di grandezza, senza i problemi che spesso si riscontrano nei sistemi meno performanti.

Ingegneria e prestazioni del ciclo termico

Il modo in cui il termociclatore quantitativo TT-Q4505T gestisce la temperatura è davvero eccezionale. La maggior parte dei termociclatori da banco standard impiega un'eternità a riscaldarsi o raffreddarsi, ma questa unità compatta da 7.5 kg è progettata per essere veloce e fornire risultati precisi e prevedibili dall'inizio alla fine del ciclo.

Con una velocità di riscaldamento massima di 7.0 °C al secondo e di raffreddamento di 6.5 °C al secondo, passa dalle fasi calda, media e fredda così rapidamente da farti girare la testa. Mentre altri modelli utilizzano semplici blocchi di metallo che trattengono il calore troppo a lungo, il nostro blocco da 45 pozzetti e 0.2 ml utilizza componenti a pompa termica ad alta velocità che assicurano che ogni singola reazione mantenga simultaneamente la stessa temperatura. 

Con un'uniformità di temperatura di ±0.25 °C e una precisione di ±0.15 °C, non c'è alcuna possibilità che una provetta sia più calda dell'altra. La temperatura è perfettamente uniforme e l'intero volume di reazione da 20 a 120 µL scorre senza intoppi, eliminando ogni incertezza.

Modalità di lettura della fluorescenza e canali di rilevamento

Avete a disposizione diversi modi per osservare ciò che accade all'interno delle provette, e la nostra configurazione a 5 canali monitora la fluorescenza con estrema precisione. È sufficientemente sensibile da catturare ogni dettaglio, ma non così potente da coprire le informazioni più fini.

• Coloranti intercalanti non specifici: Questi piccoli marcatori chimici si legano a qualsiasi filamento di DNA a doppia elica che incontrano. È economico, semplice e funziona a meraviglia. Dovrete solo controllare la "curva di fusione" finale sullo schermo per assicurarvi di non aver accidentalmente moltiplicato del materiale genetico inutilizzabile.
• Sonde specifiche per la sequenza: Questi dispositivi agiscono come missili a ricerca di calore per il vostro gene specifico. Si illuminano solo quando trovano una corrispondenza perfetta. Poiché il TT-Q4505T è dotato di 5 filtri a canale di colorante distinti, è possibile analizzare più target contemporaneamente nella stessa provetta senza che i segnali ottici si sovrappongano. È rapido, incredibilmente intelligente e vi permette di trasformare una minuscola goccia di campione in una montagna di dati cristallini.