Sistema PCR multicanale in tempo reale - Serie ToronPCR™ M
Sistema di PCR in tempo reale a 96 pozzetti (qPCR) con 4 o 6 canali di fluorescenza
Il sistema di PCR in tempo reale multicanale ToronPCR™ Serie M esegue 96 reazioni contemporaneamente con 4 o 6 canali di fluorescenza, ed è progettato per l'analisi dell'espressione genica, la genotipizzazione e i test multiplex. Un modulo di imaging CMOS cattura l'intera piastra in una singola esposizione, consentendo la lettura simultanea di tutti i pozzetti. Il modello a 4 canali è adatto a pannelli con due o tre target, mentre il modello a 6 canali supporta fino a sei target per pozzetto. Ogni modello è disponibile in formato provetta da 0.2 mL o da 0.1 mL.
Un blocco termico multizona con controllo del gradiente a sei zone consente di testare diverse condizioni di ricottura. Un touchscreen Windows da 10.1 pollici gestisce la configurazione, il rilevamento, l'analisi e l'archiviazione senza bisogno di un PC collegato. Il software classifica automaticamente i risultati positivi e negativi e supporta analisi quantitative, genotipiche, di curva di fusione e isotermiche. Il suo algoritmo Ct funziona senza colorante di riferimento, semplificando la configurazione della reazione.
Il rilevamento raggiunge una singola copia. La gamma dinamica si estende da 10⁰ a 10¹⁰ copie/μL e la ripetibilità del Ct si mantiene a CV ≤ 1%. Le connessioni USB, LAN e wireless espandibili trasferiscono i dati a un LIS o a un PC. I risultati vengono esportati come file Excel o PDF. Laboratori di ricerca, gruppi di ricerca clinica e team forensi utilizzano questo strumento qPCR a 96 pozzetti per lavori ad alto volume.
Sistema PCR multicanale in tempo reale - Applicazioni della serie ToronPCR™ M
La serie ToronPCR™ M è ideale per i laboratori che necessitano di un'elevata produttività e del rilevamento di target multipli in un'unica analisi.
- Analisi dell'espressione genica: quantifica i livelli di mRNA in molti campioni e replica con quantificazione relativa o assoluta basata su Ct
- Genotipizzazione e individuazione di SNP: separa i campioni omozigoti ed eterozigoti utilizzando la discriminazione allelica a due coloranti
- Pannelli target multiplex: rileva fino a sei target per pozzetto in una singola analisi, il che consente di risparmiare volume del campione e reagenti.
- Analisi delle mutazioni e della metilazione: screening per varianti di sequenza e stato di metilazione mediante test basati su sonde e curve di fusione
- Flussi di lavoro di clonazione e sequenziamento: verifica gli inserti e quantifica le librerie prima del sequenziamento
- Ricerca medica e clinica: supporta la quantificazione della carica virale e dei biomarcatori in contesti di ricerca
- Analisi forense: quantifica tracce di modelli di DNA, con una sensibilità fino a una singola copia
- Scienza applicata: gestisce lo screening ad alto volume nei settori alimentare, agricolo e ambientale
Sistema PCR multicanale in tempo reale - Caratteristiche principali della serie ToronPCR™ M
La serie ToronPCR™ M combina l'imaging simultaneo a 96 pozzetti, il multiplexing flessibile e un flusso di lavoro di analisi autonomo.
- Ottiche di imaging superiori: cattura tutti i 96 pozzetti nello stesso istante, con circa 1 secondo per canale e senza ritardo temporale tra i pozzetti
- Percorso della luce guidato da fibraAumenta l'intensità del segnale di fluorescenza, riduce le perdite ottiche ed elimina gli effetti di bordo.
- 4 o 6 canali di fluorescenza: copre FAM/SYBR Green I, HEX/JOE/VIC, ROX/Texas Red e Cy5/Quasar-670, con Cy5.5 e un canale personalizzabile sul modello a 6 canali
- Multiplexing a sei bersagli: non ha mostrato perdite di segnale o diafonia tra i canali nelle scansioni a sei canali, con un'efficienza di amplificazione da 0.89 a 1.05 e R² di 1.000
- Blocco a gradiente multizona: imposta diverse condizioni di reazione in un intervallo da 1 a 40 °C, in modo che una singola esecuzione ottimizzi la temperatura di ricottura
- Compensazione della temperatura del blocco: mantiene un'uniformità di ±0.2 °C a 95 °C durante il riscaldamento a una velocità media di 3.5 °C/s
- Sensibilità a copia singola: rileva un minimo di 1 copia e legge linearmente su 10 ordini di grandezza
- Elevata ripetibilità tra pozzi: ha restituito un Ct medio di 18.50 con un CV dello 0.3% su 96 repliche di plasmide, con una SD della temperatura di fusione di 0.05 °C
- Risoluzione fine del cambiamento di piega: distingue le differenze di modello a 2 e 1.5 volte
- Algoritmo CT senza colorante di riferimento: adatta punti caratteristici multi-derivati per calcolare Ct senza normalizzazione ROX, il che riduce i tempi di configurazione della reazione
- Interpretazione automatica dei risultati: monitora l'amplificazione in tempo reale e segnala risultati positivi e negativi senza calcoli manuali
- Schermo touchscreen autonomo da 10.1 pollici: esegue la configurazione, il rilevamento, l'analisi e il salvataggio su un'interfaccia Windows senza alcun PC sul banco di lavoro
- Conservazione dei campioni e controllo dell'umidità: mantiene i campioni a 4 °C e la deumidificazione automatica aiuta a limitare la condensa attorno alla piastra
- Configurazioni modulari: consente agli acquirenti di scegliere il numero di canali e il formato della provetta da 0.2 ml o 0.1 ml
- Connettività flessibileOffre tre porte USB, una porta LAN e trasmissione wireless espandibile con supporto LIS.
- Design efficiente dal punto di vista energetico: combina il raffreddamento termoelettrico con un alimentatore a corrente costante per mantenere basso il consumo energetico
Teoria e metodo
La PCR in tempo reale amplifica una sequenza bersaglio attraverso cicli ripetuti di denaturazione, annealing dei primer ed estensione della polimerasi. Un segnale fluorescente accompagna l'amplificazione. Il colorante SYBR Green I emette luce quando si lega al DNA a doppio filamento, e le sonde di idrolisi rilasciano un fluoroforo quando vengono scisse dalla polimerasi. Poiché ogni ciclo raddoppia approssimativamente la quantità di bersaglio, la fluorescenza aumenta esponenzialmente prima che i componenti della reazione si esauriscano e la curva si stabilizzi.
Il ciclo di soglia (Ct) indica il punto in cui la fluorescenza supera per la prima volta il livello di base del segnale di fondo. I campioni con una maggiore quantità di stampo iniziale superano la soglia prima, quindi Ct diminuisce in linea retta all'aumentare del logaritmo della quantità di stampo. Una serie di diluizioni di standard noti costruisce questa linea e la sua pendenza fornisce l'efficienza di amplificazione: -3.32 corrisponde al 100%. I saggi multiplex posizionano un fluoroforo diverso su ciascuna sonda target e i filtri separano le lunghezze d'onda di emissione in modo che ciascun canale legga un target.
La serie ToronPCR™ M applica questi principi con ottiche di imaging di altissima qualità. Un LED bianco ad alta potenza eccita la piastra attraverso dei filtri, le fibre ottiche trasportano la luce con basse perdite e un sensore CMOS legge tutti i 96 pozzetti contemporaneamente, in circa 1 secondo per canale. La lettura simultanea elimina le differenze di temporizzazione tra i pozzetti e gli effetti di bordo nel percorso ottico. Il controllo del blocco multizona mantiene la temperatura uniforme a ±0.2 °C a 95 °C.
Sistema PCR multicanale in tempo reale - Specifiche tecniche della serie ToronPCR™ M
| Parametro | ToronPCR™ M4 (modello a 4 canali) | ToronPCR™ M6 (modello a 6 canali) |
|---|---|---|
| Provette compatibili (versione da 0.2 mL) | Piastra a 96 pozzetti da 0.2 mL, provetta singola, provetta a 8 strisce | Piastra a 96 pozzetti da 0.2 mL, provetta singola, provetta a 8 strisce |
| Provette compatibili (versione "A" da 0.1 mL) | Piastra a 96 pozzetti da 0.1 mL, provetta singola, provetta a 8 strisce | Piastra a 96 pozzetti da 0.1 mL, provetta singola, provetta a 8 strisce |
| Volume del campione | da 10 a 100 μL | da 10 a 100 μL |
| Numero di canali | 4 | 6 |
| Canali di rilevamento / Coloranti applicati | F1: FAM, SYBR Green I, ecc.; F2: HEX, JOE, VIC, ecc.; F3: ROX, Texas Red; F4: Cy5, Quasar-670 | F1: FAM, SYBR Green I, ecc.; F2: HEX, JOE, VIC, ecc.; F3: ROX, Texas Red; F4: Cy5, Quasar-670; F5: Cy5.5; F6: personalizzabile (predefinito ATTO 425) |
| Gamma dinamica | da 10⁰ a 10¹⁰ copie/μL | da 10⁰ a 10¹⁰ copie/μL |
| Rilevamento minimo | copia 1 | copia 1 |
| Sorgente luminosa di eccitazione | LED bianco ad alta potenza | LED bianco ad alta potenza |
| Rilevamento dell'elemento | CMOS ad alte prestazioni | CMOS ad alte prestazioni |
| Ripetibilità della TC | CV ≤ 1% | CV ≤ 1% |
| Linearità del campione (Ct) | |r| ≥ 0.999 | |r| ≥ 0.999 |
| Intervallo di temperatura | 4 a 99.9 ° C | 4 a 99.9 ° C |
| Modalità di controllo della temperatura | Controllo a blocco / controllo a tubo | Controllo a blocco / controllo a tubo |
| Tasso di riscaldamento medio | 3.5 °C/s | 3.5 °C/s |
| Tasso di raffreddamento medio | 2.5 °C/s | 2.5 °C/s |
| Uniformità della temperatura | ±0.2 °C a 95 °C | ±0.2 °C a 95 °C |
| Precisione temperatura | ± 0.15 ° C | ± 0.15 ° C |
| Precisione del controllo della temperatura | 0.1 ° C | 0.1 ° C |
| Risoluzione della temperatura di fusione | Differenziazione minima 0.1 °C | Differenziazione minima 0.1 °C |
| Modalità sfumatura | Controllo della temperatura a gradiente a 6 zone | Controllo della temperatura a gradiente a 6 zone |
| Intervallo di temperatura del gradiente | 1 a 40 ° C | 1 a 40 ° C |
| Temperatura del coperchio riscaldato | 30 a 110 ° C | 30 a 110 ° C |
| Display | Touchscreen 10.1 pollici | Touchscreen 10.1 pollici |
| Dimensioni (L × P × A) | 298 × 530 × 430 mm | 298 × 530 × 430 mm |
| Alimentazione in ingresso | Da 100 a 240 V CA, da 50 a 60 Hz | Da 100 a 240 V CA, da 50 a 60 Hz |
| Porte esterne | USB (Tipo A) × 3, LAN × 1 | USB (Tipo A) × 3, LAN × 1 |
| Funzione wireless | Trasmissione wireless espandibile, supporto LIST | Trasmissione wireless espandibile, supporto LIST |
| Formato di esportazione dei dati | Excel, PDF | Excel, PDF |