Sistema de PCR en tiempo real (qPCR): termociclador cuantitativo TT-Q4505T

Teoría básica de cuantificación de qPCR

En lugar de conformarse con líneas de base inestables y lecturas confusas, el sistema de PCR en tiempo real TT-Q4505T combina el proceso de copia de cadenas de ADN con la captura de instantáneas de alta velocidad de los trazadores luminosos mientras la reacción aún está en curso. 

Gracias a un avanzado sistema de detección por fibra óptica que acelera la obtención de imágenes, esta máquina de qPCR no espera a que termine el proceso para mostrarle los resultados. Registra las cifras exactas ciclo a ciclo directamente en una elegante pantalla táctil de 7 pulgadas, eliminando los cálculos complejos y ofreciéndole un conjunto de datos perfectamente claros.

Seguimiento de la fase exponencial

La estrategia principal se basa en el seguimiento de esos compuestos fluorescentes que brillan con mayor intensidad cada vez que aparece una nueva secuencia de ADN. Gracias a una potente fuente de excitación LED y a fotodiodos sensibles, nuestro sistema de PCR en tiempo real registra esa luz justo en el momento en que la señal aumenta más rápidamente. Esto da como resultado picos notablemente más nítidos y definidos para su análisis.

Metodología del ciclo de cuantificación (Cq/Ct)

Buscamos ese instante preciso en el que la fluorescencia finalmente emerge del ruido de fondo. Es como ver una linterna brillante en una habitación completamente oscura. Ese número de ciclo específico indica con exactitud la cantidad de material inicial que se vertió en el tubo al principio, lo que proporciona la precisión suficiente para detectar diferencias de concentración de tan solo 1.5 veces.

Sensibilidad y rango de medición

Cuando todo está perfectamente ajustado, se puede detectar incluso una sola copia de un gen objetivo. Mantiene una precisión increíble incluso con una gran variedad de muestras. En concreto, hablamos de 10 logaritmos sólidos de rango dinámico lineal, sin los problemas habituales que suelen presentarse en sistemas menos avanzados.

Ingeniería y rendimiento del ciclo térmico

La forma en que el termociclador cuantitativo TT-Q4505T gestiona la temperatura es algo totalmente distinto. La mayoría de los bloques de sobremesa estándar tardan muchísimo en calentarse o enfriarse, pero esta unidad compacta de 7.5 kg está diseñada para funcionar con rapidez y ofrecer resultados fiables y predecibles de principio a fin.

Con velocidades máximas de calentamiento de 7.0 °C por segundo y de enfriamiento de 6.5 °C por segundo, pasa entre las etapas caliente, media y fría con tal rapidez que podría dejarte boquiabierto. Mientras que otros modelos utilizan bloques metálicos básicos que retienen el calor durante demasiado tiempo, nuestro bloque de 45 pocillos y 0.2 ml utiliza componentes de bomba térmica de alta velocidad que garantizan que cada reacción se mantenga al mismo nivel de temperatura simultáneamente. 

Con una uniformidad de temperatura de ±0.25 °C y una precisión de ±0.15 °C, no hay posibilidad de que un tubo esté más caliente que el otro. La temperatura es totalmente uniforme, manteniendo el volumen de reacción de 20 a 120 µL en movimiento sin ninguna interrupción, para que no tengas que adivinar.

Modos de lectura de fluorescencia y canales de detección

Dispones de varias formas de observar lo que ocurre dentro de los tubos, y nuestra configuración de 5 canales monitoriza la fluorescencia con una precisión milimétrica. Es lo suficientemente sensible como para captar cada detalle, pero no tan ruidosa como para enmascarar los datos precisos.

• Colorantes intercalantes no específicos: Estos pequeños marcadores químicos se adhieren a cualquier ADN de doble cadena que encuentren. Es económico, sencillo y funciona de maravilla. Solo tendrás que observar la curva de fusión final en tu pantalla para verificar que no hayas multiplicado accidentalmente material genético no deseado.
• Sondas específicas de secuencia: Estos sensores actúan como misiles teledirigidos hacia tu gen específico. Solo se iluminan cuando encuentran una coincidencia perfecta. Gracias a que el TT-Q4505T cuenta con 5 filtros de canal de tinte distintos, puedes buscar múltiples objetivos diferentes a la vez en el mismo tubo sin que las señales ópticas se enreden. Es rápido, increíblemente inteligente y te permite obtener una gran cantidad de datos nítidos a partir de una pequeña gota de muestra.